?Sanger

Sanger發(fā)音

英：[?s??ɡ?]　　美：[?s???]

英：　　美：

Sanger中文意思翻譯

Sanger測序的原理？

Sanger測序是一種DNA測序方法，由Frederick Sanger等人發(fā)明。其原理是通過(guò)在DNA合成過(guò)程中逐漸加入一種二進(jìn)制的特殊核苷酸，使其在合成過(guò)程中隨機地被加入，并以此得到DNA序列信息。

下面是詳細的Sanger測序原理及步驟：

1. 實(shí)驗人員首先需要將待測DNA復制許多份，即制備大量的DNA模板。

2. 對DNA模板進(jìn)行PCR擴增，以增大樣本中目標序列數量。

3. 在PCR反應中，使用特殊的、與普通核苷酸不同的dNTPs，稱(chēng)為ddNTPs。ddNTPs在DNA合成中一旦被加入，便會(huì )終止合成，從而導致合成長(cháng)度的隨機截斷。

4. 截斷出的DNA片段分別按照大小進(jìn)行電泳分離。

5. 逐個(gè)讀取DNA分子，根據大小排序。使用帶標簽的引物，利用熒光或放射性標記物來(lái)掃描單個(gè)ddNTP引起的 DNA鏈的末端長(cháng)度。熒光會(huì )因dNTPs生物化學(xué)反應而失活。

6. 以這種方式進(jìn)行的一次測序，只能獲得目標DNA區域的一端，需要反復進(jìn)行多次測序。

7. 最后，通過(guò)多次測序結果疊加得到目標DNA序列。

Sanger 雙脫氧法測序原理，簡(jiǎn)述測序技術(shù)發(fā)展趨勢

DNA鏈中的核苷酸是以3`，5`-**酸二酯鍵相連接，合成DNA所用的底物是2`-脫氧核苷三**酸（dNTP），在Sanger 雙脫氧鏈終止法中被摻入了2`，3`-雙脫氧核苷三**酸(ddNTP),當ddNTP位于鏈延伸末端時(shí), 由于它沒(méi)有3`- OH，不能再與其它的脫氧核苷酸形成3′,5′-**酸二酯鍵，DNA合成便在此處終止，如果此處摻入的是一個(gè)ddATP，則新生鏈的末端就是A，依次類(lèi)推可以通過(guò)摻入ddTTP、 ddCTP、 ddGTP ，則新生鏈的末端為T(mén)、C或G，根據這個(gè)原理，Sanger與1977年建立了雙脫氧鏈終止測序法。他本人也因此而獲得了諾貝爾獎。

以單鏈或雙鏈DNA為模板，采用DNA引物引導新生DNA的合成，因此又稱(chēng)為引物合成法，或酶促引物合成法。主要是基于DNA聚合酶的催化特性：①以DNA為模板，根據堿基配對的原則逐個(gè)將dNTP加到與模板結合的寡核苷酸引物的3′-OH末端，形成正確的模板DNA互補鏈；②能以dNTP作為底物，也能利用ddNTP作底物，將其摻入寡核苷酸鏈的3 ′末端而終止新生互補鏈的延伸。

如果在DNA的合成反應中，除了加入4種正常的脫氧核苷三**酸（dNTP）外，再加入一種少量的2ˊ,3ˊ ddNTP，那么多核苷酸鏈的延伸將與偶然發(fā)生但卻十分特異的鏈終止展開(kāi)競爭，所以反應產(chǎn)物是一系列的長(cháng)短不一的核苷酸鏈。

在4組獨立的DNA合成反應中，分別加入4種不同的ddNTP，結果將生成4組核苷酸鏈，它們將分別（隨機）終止于每一個(gè)A，每一個(gè)G，每一個(gè)C，每一個(gè)T的位置上。對這4組核苷酸鏈進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，就可讀出序列。

測序現在是第二代技術(shù)為主，454，solexa,solid等等，以后將基于納米技術(shù)，進(jìn)行單分子測序

比如隧道探針?lè )ǖ?/p>